闵行DNA亲子鉴定之唾液（斑）DNA提取

唾液（斑）中含有脱落的口腔上皮细胞，唾液（斑）上皮细胞DNA的提取可采用有机溶剂提取法，Chelex-100提取法和磷酸缓冲液法，具体操作如下：

1．有机提取法：

(1)将适量标本剪碎置离心管中，加入Iml生理盐水轻轻混匀冲洗细胞，5000r/min离J心

10min，弃上清后再重复一遍。

(2)在沉淀的上皮细胞中加入400t/lTES（15mmol/，15mmol/,15mmol/LNaCl），lOOoC温浴lOmin，冷却至室温再加10%SDS,lOmg/mlPK，使其终浓度分别为1%，lOOtLg/ml，37℃消化过夜。

(3)等体积饱和酚和氯仿各抽提2次，上清用2.5倍体积冰无水乙醇沉淀，1000r/min离心lOmin，沉淀晾干，灭菌去离子水溶解备用（当样品中DNA含量很少时，如果用TE缓冲液溶解，其中的EDTA浓度过高，抑制TaqDNA聚合酶活性，所以此时建议用无菌水溶解DNA)。

2．Chelex-100提取法：

(1)将适量斑迹剪碎，加入装有200V15%Chelex溶液的离心管中。

(2)特lOmg/ml蛋白酶K2阻加入管中，轻轻混匀。高速震荡溶液5～10s，一定要使沉淀悬浮起来。

(3)在56℃水浴中温浴20min，高速震荡溶液5～10s。

(4)100℃煮沸8min，高速震荡溶液5～10s。

(5)在室温下15000r/min离心2min。上清用于PCR反应。4℃保存备用或-20℃储存。

3．磷酸盐缓冲液法：

(1)将适量斑迹剪碎，置于装有ImlPBS缓冲液中，1500r/min离心5min，沉淀细胞，弃上清。

(2)用50—300µl钾缓冲液悬起细胞沉淀。55℃消化1h(裂解细胞，释放DNA)。

(3)95℃水浴10min，灭活蛋白酶K，-20℃保存备用。

（二）口腔拭子中DNA的提取

1．将其放入装有200til的5%c1．elex-100的1.5ml离心管内，轻轻搅动，使细胞脱落。

2．56℃温Y15～30min，高速振荡5～10S。

3．100℃煮沸8min后立即高速振荡5～10s，15000r/min离心2min。上清即可用于进行PCR反应。

注意事项：

唾液斑检材DNA提取，检材加入量不易量化，应结合检材具体情况调整。建议如下：

1．烟蒂中能否提取出DNA与烟蒂是否沾有口腔脱藩上皮细胞有关，也与抽烟者抽烟时口含烟蒂多少的习惯有关，并不是所有烟蒂均能提取出足够量的染色体DNA用于检验，DNA的提取必需用沾有唾液或口唇上皮细胞的那部分检材。不能将整个烟蒂全部投入，否则过大的载体会影响DNA的提取。烟蒂检材一般剪取0.3～0.5cm高的烟蒂，将外层纸剪碎放入1.5ml离心管中；

2．口腔拭子是国外建立DNA数据库首选的检材，立法时它属体外标本。因此，用口腔拭子进行PCR分型很多见。取单根拭子头部的1/3～1/4装入1.5ml离心管中或用牙签刮拭口腔粘膜。

3．口香糖检材取1/2左右，用无菌剪刀尽量剪碎，放入1.5ml离心管，如含泥土等，先用无菌水洗干净。

4．咬痕唾液斑检材，纱布或棉拭子擦拭咬痕部位。用纱布提取的剪取0.1～0.2cm2，棉拭子取头部1/2外层部分。

中山市实验dna亲子鉴定地点位置在哪？

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隐私亲子鉴定可匿名邮递如下样本：带毛囊的毛发，口腔粘膜（口腔拭子）烟头、指甲、口香糖、牙刷等样本到实验室进行鉴定。

广州做无创dna鉴定需要空腹吗？

鉴定分析：

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中山做亲子鉴定指定的地方？

鉴定分析：

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在办理无创胎儿亲子鉴定过程中对于采样或身体方面有如下情况的，请向工作人员提出。

1、一年内有减胎史；

2、一年内有输血史或异体细胞治疗等情况；

3、家族遗传史；

中山市dna亲子鉴定要多少钱？

鉴定分析：

中山市dna亲子鉴定费用在2600至5000元之间，具体费用将根据鉴定类型与样本数量、加急情况而定。可咨询中山华核基因工作人员获取亲子鉴定相关的内容，纯粹个人了解孩子身世，可提前一天与工作人员约定鉴定时间，到实验室由工作人员采样，鉴定过程工作人员将严格保障客户隐私，报告准确率高，一般4-7天出报告，可加急。

意见建议：

可匿名邮寄被鉴定人双方的指甲片、带毛囊的毛发等任意样本邮寄到实验室进行鉴定。如需了解司法亲子鉴定也可以咨询工作人员。

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