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闵行DNA亲子鉴定之唾液(斑)DNA提取

2022-09-03 04:06作者:admin

唾液(斑)中含有脱落的口腔上皮细胞,唾液(斑)上皮细胞DNA的提取可采用有机溶剂提取法,Chelex-100提取法和磷酸缓冲液法,具体操作如下:

1.有机提取法:

(1)将适量标本剪碎置离心管中,加入Iml生理盐水轻轻混匀冲洗细胞,5000r/min离J心

10min,弃上清后再重复一遍。

(2)在沉淀的上皮细胞中加入400t/lTES(15mmol/,15mmol/,15mmol/LNaCl),lOOoC温浴lOmin,冷却至室温再加10%SDS,lOmg/mlPK,使其终浓度分别为1%,lOOtLg/ml,37℃消化过夜。

(3)等体积饱和酚和氯仿各抽提2次,上清用2.5倍体积冰无水乙醇沉淀,1000r/min离心lOmin,沉淀晾干,灭菌去离子水溶解备用(当样品中DNA含量很少时,如果用TE缓冲液溶解,其中的EDTA浓度过高,抑制TaqDNA聚合酶活性,所以此时建议用无菌水溶解DNA)。

2.Chelex-100提取法:

(1)将适量斑迹剪碎,加入装有200V15%Chelex溶液的离心管中。

(2)特lOmg/ml蛋白酶K2阻加入管中,轻轻混匀。高速震荡溶液5~10s,一定要使沉淀悬浮起来。

(3)在56℃水浴中温浴20min,高速震荡溶液5~10s。

(4)100℃煮沸8min,高速震荡溶液5~10s。

(5)在室温下15000r/min离心2min。上清用于PCR反应。4℃保存备用或-20℃储存。

3.磷酸盐缓冲液法:

(1)将适量斑迹剪碎,置于装有ImlPBS缓冲液中,1500r/min离心5min,沉淀细胞,弃上清。

(2)用50—300µl钾缓冲液悬起细胞沉淀。55℃消化1h(裂解细胞,释放DNA)。

(3)95℃水浴10min,灭活蛋白酶K,-20℃保存备用。

(二)口腔拭子中DNA的提取

1.将其放入装有200til的5%c1.elex-100的1.5ml离心管内,轻轻搅动,使细胞脱落。

2.56℃温Y15~30min,高速振荡5~10S。

3.100℃煮沸8min后立即高速振荡5~10s,15000r/min离心2min。上清即可用于进行PCR反应。

注意事项:

唾液斑检材DNA提取,检材加入量不易量化,应结合检材具体情况调整。建议如下:

1.烟蒂中能否提取出DNA与烟蒂是否沾有口腔脱藩上皮细胞有关,也与抽烟者抽烟时口含烟蒂多少的习惯有关,并不是所有烟蒂均能提取出足够量的染色体DNA用于检验,DNA的提取必需用沾有唾液或口唇上皮细胞的那部分检材。不能将整个烟蒂全部投入,否则过大的载体会影响DNA的提取。烟蒂检材一般剪取0.3~0.5cm高的烟蒂,将外层纸剪碎放入1.5ml离心管中;

2.口腔拭子是国外建立DNA数据库首选的检材,立法时它属体外标本。因此,用口腔拭子进行PCR分型很多见。取单根拭子头部的1/3~1/4装入1.5ml离心管中或用牙签刮拭口腔粘膜。

3.口香糖检材取1/2左右,用无菌剪刀尽量剪碎,放入1.5ml离心管,如含泥土等,先用无菌水洗干净。

4.咬痕唾液斑检材,纱布或棉拭子擦拭咬痕部位。用纱布提取的剪取0.1~0.2cm2,棉拭子取头部1/2外层部分。

中山市实验dna亲子鉴定地点位置在哪?

鉴定分析:

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意见建议:

隐私亲子鉴定具有:办理流程简便、私密性强,精准度高等特点。可自行采集样本匿名邮寄到实验室进行鉴定或前往实验室现场采样。鉴定过程全程保密,鉴定报告可由工作人员邮递给客户或客户到场自提。

隐私亲子鉴定可匿名邮递如下样本:带毛囊的毛发,口腔粘膜(口腔拭子)烟头、指甲、口香糖、牙刷等样本到实验室进行鉴定。

广州做无创dna鉴定需要空腹吗?

鉴定分析:

无创dna亲子鉴定并不需要空腹进行,如不方便前往实验室取样,建议联系广州华粤基因,在职员的指引下取样,采集完毕后匿名邮寄到实验室鉴定即可。

意见建议:

可采集对方带毛囊的毛发等任意样本与女方自己的血样送往实验室做鉴定即可。

中山做亲子鉴定指定的地方?

鉴定分析:

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意见建议:

在办理无创胎儿亲子鉴定过程中对于采样或身体方面有如下情况的,请向工作人员提出。

1、一年内有减胎史;

2、一年内有输血史或异体细胞治疗等情况;

3、家族遗传史;

中山市dna亲子鉴定要多少钱?

鉴定分析:

中山市dna亲子鉴定费用在2600至5000元之间,具体费用将根据鉴定类型与样本数量、加急情况而定。可咨询中山华核基因工作人员获取亲子鉴定相关的内容,纯粹个人了解孩子身世,可提前一天与工作人员约定鉴定时间,到实验室由工作人员采样,鉴定过程工作人员将严格保障客户隐私,报告准确率高,一般4-7天出报告,可加急。

意见建议:

可匿名邮寄被鉴定人双方的指甲片、带毛囊的毛发等任意样本邮寄到实验室进行鉴定。如需了解司法亲子鉴定也可以咨询工作人员。

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